Дослідження оптимізації процесу очищення рідини для збирання курячих ембріонів від вірусу грипу IV типу (частина 1)

Грип (також відомий як грип) — це дуже заразне респіраторне інфекційне захворювання, яке може викликати різноманітні респіраторні захворювання. Згідно з авторитетними даними Всесвітньої організації охорони здоров’я (ВООЗ), щороку віруси грипу загрожують приблизно одному мільярду людей. Віруси грипу (IV) належать до сімейства Orthomyxoviridae і є одноланцюговими-вірусами негативної{3}}смислової РНК. Частинки вірусу грипу сферичні, діаметром 80-120 нм, і їх структуру зовні можна розділити на три шари: оболонку, білки матриці та ядро.

 

Будова вірусів грипу А і В

Противірусні препарати та пряма вакцинація проти грипу є вирішальними кроками в сучасному лікуванні та профілактиці грипу. В даний час матриця курячих ембріонів і клітинна матриця є широко використовуваними методами для дослідження вакцини проти грипу, причому дослідники як у країні, так і за кордоном найчастіше вибирають курячі ембріони для приготування рідини для вірусу грипу. Алантоїсна вірусна рідина курячого ембріона містить численні домішки, такі як овальбумін і вірусні структурні білки. Овальбумін є важливим компонентом, який може спричиняти алергічні реакції в осіб, імунізованих вакциною-. Таким чином, освітлення, концентрація та очищення рідини алантоїсного вірусу курячого ембріона є важливими кроками в розробці вакцин проти вірусу грипу.

Зараз широко використовуваною технологією очищення рідини для збору вірусів є центрифугування + глибока фільтрація. Основними методами очищення вірусу грипу є ультрафільтрація, ультрацентрифугування, гель-фільтраційна хроматографія та комбінована хроматографія.

Метою цього дослідження є вивчення інфекційних характеристик чотирьох вірусів грипу-H1N1, H3N2, BV і BY-у курячих ембріонів віком 9-11 днів. Одновалентну вірусну алантоїсну рідину було отримано шляхом культивування курячих ембріонів, щоб забезпечити базовий матеріал для подальшої обробки вірусів. Під час дослідження порівнювали різні методи освітлення, концентрації та очищення для оптимізації відділення цільового білка від інших компонентів (таких як різні білки та овальбумін).

Дорожня карта експериментальних технологій

Курячі ембріони культивували при 37 градусах протягом 9-11 днів. Потім вони були щеплені вірусом грипу A (A1 для H1N1, A3 для H3N2) з MOI 1:10000 і вірусом грипу B (B1 для BV, B2 для BY) з MOI 1:10000. Віруси H1N1 і H3N2 культивували при 33-34 градусах протягом 48 годин, а віруси BV і BY культивували при 33 градусах протягом 7,2 годин. Потім ембріони охолоджували, а алантоїсну рідину збирали. Алантоїсна рідина мала високий загальний вміст білка, високу в'язкість і виглядала каламутною, що ускладнювало очищення.

Вплив різних процесів освітлення на якість збірної рідини вірусу грипу IV типу

Освітлення є важливим кроком у процесі очищення, слугуючи попередньою попередньою обробкою для великої кількості нерозчинних домішок. На цьому етапі в якості сировини використовується алантоїсна рідина. Після безперервного високошвидкісного центрифугування рідина очищується та фільтрується через фільтрувальні картриджі з розміром пор 3 мкм і 0.8+0.45 мкм і 3 мкм і 0.8+0.65 мкм. Досліджується вплив двох розмірів фільтрувальних картриджів на процес освітлення та результати, а також вибирається відповідна схема освітлення для визначення оптимального процесу освітлення.

Результати чотирьох типів тестів очищувальної рідини на вірус грипу показано на малюнках 1-3 . CA1-1 представляє результати перевірки освітлюючої рідини з використанням фільтрувальних картриджів 3 мкм і 0.8+0.65 мкм, CA1-2 представляє результати перевірки освітлюючої рідини з використанням фільтрувальних картриджів 3 мкм і 0.8+0.45 мкм, а решта схожі.

Рисунок 1. Результати визначення загального вмісту білка в освітленому розчині вірусу грипу -

Рисунок 2. Результати визначення титру гемаглютинації вірусу грипу освітленого розчину -

Рисунок 3. Результати виявлення освітленого розчину вірусу грипу - загальна швидкість видалення білка

Результати показали, що незважаючи на чисельні відмінності у загальному вмісті білка та загальному рівні видалення білка між групами, суттєвих відмінностей не було. Це може бути тому, що розміри пор картриджів фільтра були занадто малими, і всі могли відповідати вимогам до освітлення. Що стосується титру згортання крові, картриджі фільтра 3 мкм і 0.8+0.45 мкм показали вищі титри згортання крові. Тому для оптимального освітлення було обрано менші розміри пор картриджів фільтра 3 мкм і 0.8+0.45 мкм.

Література: Huang, Zhentian. Оптимізація процесу виробництва квадривалентної спліт-вакцини проти вірусу грипу [D]. Шеньянський сільськогосподарський університет, 2024. DOI:10.27327/d.cnki.gshnu.2024.001595.